Cultura de Tecidos em Plantas de Cannabis: O que é?

• 1. A história da cultura de tecidos
• 2. Os fundamentos da cultura de tecidos
• 3. O que é cultura de tecidos vegetais e como funciona?
• 4. Cultura de tecidos vs clonagem
• 4. a. Clonagem
• 4. b. Cultura de tecidos vegetais
• 5. Os 5 passos da cultura de tecidos
• 5. a. Como fazer cultura de tecidos vegetais em casa
• 5. b. Guia de composição química
• 6. Conclusão

A cultura de tecidos consiste em retirar um tecido vivo de uma planta e cultivá-lo até virar uma planta completa em condições estéreis. Esse processo existe desde 1885 e é relativamente novo com sementes de cannabis, mas é altamente eficaz e pode ser utilizado com a maioria das espécies de plantas. O processo de cultura de tecidos resulta em uma fonte estabilizada de tecido vegetal que técnicos podem preservar através da multiplicação das células vegetais. Mantendo esse germoplasma em instalações limpas e seguras, é possível guardar e propagar continuamente cultivares e fenótipos específicos de plantas. Essa técnica, em última análise, ajuda a preservar plantas raras, ou manter vivos e saudáveis fenótipos produtivos e potentes para serem usados no campo quando multiplicados. Você pode enxergar culturas de tecidos como "bancos" de genética que são conservados em condições especiais até serem requisitados para serem transplantados para recipientes ou para o solo.

1. A História da Cultura de Tecidos

A história da cultura de tecidos remonta ao ano de 1885, quando um zoologista alemão tentou cultivar tecido de um embrião de pintinho, mas só em 1907 um zoologista americano conseguiu cultivar com sucesso uma célula do nervo de sapo.

Mais tarde, em 1910, um cirurgião francês aperfeiçoou esta técnica e definiu o que era cultura de tecidos. Uma vez definida e estabelecida a técnica, diversos outros experimentos tiveram sucesso e permitiram que outros pesquisadores cultivassem células-tronco sob condições artificiais, o que levou a avanços no conhecimento da biologia humana e na medicina regenerativa. Mas, você deve estar se perguntando O que isso tem a ver com cannabis?

2. Os Fundamentos da Cultura de Tecidos

Então, antes de aprofundar sobre cultura de tecidos, como funciona e as diferenças entre cultura de tecidos e clonagem, vamos aprender sobre o essencial da cultura de tecidos.

Pesquisa

Se você vai tentar cultura de tecidos em casa, o primeiro passo é pesquisar se já foi feito com sucesso com aquela variedade específica para que você possa seguir o mesmo procedimento e talvez usá-lo como guia para saber o que fazer ou não fazer.

Tecido Vegetal

Agora que você sabe o que seguir, o próximo passo é obter a planta que deseja utilizar no processo de cultura de tecidos. A planta doadora deve estar 100% saudável e sem doenças. Além disso, a parte da planta utilizada depende de espécie para espécie, então certifique-se de seguir as diretrizes citadas anteriormente para aumentar as chances de sucesso. Lembre-se de que esse processo depende de um ambiente limpo, então garanta que tudo esteja limpo e esterilizado, incluindo suas roupas, materiais e a própria sala porque a contaminação é a principal razão para falhas.

Ar

O próximo fator é o ar, pois as plantas vão precisar de ar limpo. Para garantir a limpeza do ar, você pode comprar uma caixa de luvas improvisada ou fazer a sua própria usando, por exemplo, um aquário velho e tubos de PVC.

O Meio

Uma das partes mais importantes da cultura de tecidos é o meio, já que é onde a planta será colocada quando estiver grande o suficiente. O meio deve ser uma substância tipo gel que ofereça estabilidade e apoio para o desenvolvimento das raízes, crescimento da planta e nutrientes para que a planta produza energia para crescer. Por isso, um dos meios mais populares é o Ágar.

Agora que você já tem uma ideia melhor do que é necessário, continue lendo para entender como fazer cultura de tecidos em plantas de cannabis e todos os tipos de plantas. Lembre-se apenas de que a cultura de tecidos pode ser difícil se você não tiver o material e o equipamento certos, mas não se preocupe. Você sempre pode clonar suas plantas; embora o número de clones dependa do número de galhos que sua planta produz, é muito, muito mais fácil e não exige muita experiência. Tudo o que você precisa é de gel para clonagem e uma tesoura, e pronto!

3. O que é Cultura de Tecidos Vegetais e Como Funciona? 

Cultura de tecidos é exatamente o que foi explicado acima: basicamente obter alguns pedaços de tecido vegetal ou células e desenvolver centenas ou até milhares de clones idênticos a partir deles. Esse método permite que cultivadores preservem uma determinada variedade quase para sempre, com mínimo espaço e esforço. Assim como na clonagem comum, a cultura de tecidos começa com uma pequena parte da planta que você quer clonar; diferentemente da clonagem comum, esta amostra de tecido é aparada, esterilizada e, depois de limpa, é colocada em um meio nutritivo que oferece não apenas nutrientes, mas também hormônios e açúcares.

Esse meio nutritivo depende e é basicamente preparado para cada cultura de tecidos, pois alguns nutrientes e hormônios vão desencadear determinados estágios do desenvolvimento. Portanto, se você quiser estimular crescimento, desenvolvimento de raízes e/ou multiplicação (quando a planta estiver grande o suficiente para isso), será preciso oferecer um meio de nutrientes específico para o desenvolvimento desejado. Basicamente, você teria um pedaço de tecido e, assim que crescer o bastante, ele pode ser cortado em centenas de pedaços para serem clonados separadamente, se for isso que você quer. Quando esses tecidos estiverem grandes o suficiente para crescer, receberão um meio nutritivo que incentivará o enraizamento e depois o crescimento.

4. Cultura de Tecidos vs Clonagem

À medida que a indústria da cannabis evolui, cultivadores comerciais estão buscando as melhores formas de obter mais rendimento e potência em menos tempo. Sempre que possível, estão mudando de clonagem para cultura de tecidos, mas por quê?

Clonagem 

Como você já deve saber, a clonagem consiste em retirar estacas de uma planta e aguardar até que ela desenvolva raízes para poder cultivá-la; este clone será uma cópia exata de sua planta mãe.

Mas clones podem ser pouco confiáveis como mudas porque pode ser difícil conseguir boa taxa de sobrevivência, além disso, eles são suscetíveis a pragas, infecções, doenças e, conforme as gerações passam, torna-se cada vez mais fácil obter mutações genéticas. Já com a cultura de tecidos é bem diferente.

Cultura de tecidos vegetais

O processo de cultura de tecidos é relativamente simples, mas exige muito controle para garantir as condições corretas, pois laboratórios de cultura de tecidos precisam:

Esterilização

Culturas de tecidos requerem um ambiente ideal para que as plantas cresçam. Esse ambiente deve oferecer tudo o que a planta precisa de forma facilmente absorvível, mas também é ideal para bactérias e microrganismos prejudiciais. Assim, tudo deve ser esterilizado. Essa esterilização é fundamental porque fungos e bactérias podem acabar matando suas plantas, então não é só o laboratório que deve ser esterilizado, mas também as ferramentas, equipamentos e até mesmo o tecido (também chamado de "explante").

Ambiente asséptico  

É essencial realizar todo o processo em um ambiente completamente estéril. Em condições ideais, cria-se uma câmara especial permitindo manuseio de equipamentos que já estejam estéreis. Esse ambiente especial é usado sempre que você precisa expor qualquer coisa como ferramentas, equipamentos ou tecido ao ar.

As doenças podem facilmente contaminar o ambiente de trabalho; esporos de fungos estão sempre presentes no ar. Para evitar a contaminação de plantas in vitro (aquelas cultivadas em recipientes de vidro como placas de Petri), técnicos costumam trabalhar em frente ou sob uma capela de fluxo laminar. Esses aparelhos usam ventiladores para filtrar o ar através de um filtro HEPA—um equipamento capaz de filtrar contaminantes muito pequenos do ar, como vírus, bactérias e esporos de fungos. O ar limpo soprado sobre a área de trabalho em fluxo laminar evita que partículas caiam em pratos abertos.

Meio especial de cultivo

Na cultura de tecidos, um meio estéril é feito para fornecer à planta nutrientes, açúcar, água e um local para crescer. Este meio proporciona tudo o que sua planta precisa para sobreviver até virar uma planta completa. O meio pode ser feito em casa com pó pré-pronto, açúcar e água destilada ajustados para pH 5,8. Apesar de relativamente simples, requer muitos cuidados com a segurança.

5. Os 5 Passos da Cultura de Tecidos

Aqui estão os 5 passos simples da cultura de tecidos vegetais em laboratório, lembrando que este é um resumo de todo o processo.

1. Selecione a planta que deseja usar;
2. Coloque o tecido no ambiente estéril, remova um pedaço, limpe-o e deixe crescer no meio adequado;
3. Garanta condições ideais e deixe o tecido se multiplicar (normalmente leva 14 dias);
4. Induza o enraizamento da planta;
5. Transplante para o recipiente final e deixe crescer.

Se você deseja um passo a passo mais detalhado e como preparar em casa, aqui vai um guia. Apenas lembre-se de que você precisará de ferramentas caras, então mesmo sendo DIY, é necessário equipamento especial.

Como fazer cultura de tecidos vegetais em casa

Se você tem interesse em um guia de como fazer cultura de tecidos em plantas de cannabis, aqui está um passo a passo detalhado. Como dito acima, você precisará de equipamento especial, mas é totalmente possível realizar o processo em casa.

Fase de iniciação (1-2 semanas)

Passo 1

Ligue a capela de fluxo laminar por pelo menos 30min antes de começar. Se você não tiver uma, use um queimador ou lamparina de álcool e trabalhe próximo à chama.

Passo 2

Esterilize a capela de fluxo com etanol a 70%, mas não borrife diretamente no filtro.

Passo 3

Ligue seu esterilizador e deixe-o aquecer por 20min.

Passo 4

Esterilize um pacote de papel em ciclo seco, depois esterilize os frascos, água e tween em ciclo lento.

Passo 5

Para preparar o meio, pegue um recipiente, preencha com água de osmose reversa, água destilada ou deionizada (ideal). Se estiver preparando 1L de meio, coloque 900ml de água. Depois adicione os nutrientes Grow até atingir EC de 1,5, depois adicione 30g/L de açúcar e ajuste o pH para 5,7, então adicione 6g/L de ágar e coloque em um frasco autoclavável sem encher demais. Leve ao esterilizador por 15min, depois divida cerca de 50ml em cada frasco esterilizado que usará.

Passo 6

Com o meio pronto, prepare uma solução com 0,5% de água sanitária e 0,1% de tween estéril 20. Se só tiver água sanitária a 2,75%, adicione 181ml por 1L.

Passo 7

Preencha um recipiente com um pouco de água, coloque o material da cannabis na água, certificando-se que está saudável. Se for armazenar o material por mais de 1 hora, coloque em uma caixa térmica com gelo e tente colocar na água o quanto antes.

Passo 8

Pegue um recipiente esterilizado e encha cerca de 80% com a solução de água sanitária e tween, adicione o material da planta e feche.

Passo 9

Agite suavemente por 20 min, depois agite vigorosamente por 20 segundos após os 20min iniciais.

Passo 10

Transfira o material para outro frasco com 80% de água esterilizada, agite suavemente por 5 minutos e repita mais 2 vezes.

Passo 11

Use pinças estéreis para transferir o material para um papel estéril para absorver o excesso de água e coloque um pedaço de material vegetal por frasco. A planta deve ficar na posição vertical dentro do frasco, depois coloque em um rack a 25°C sob ciclo de luz 18/6 por no mínimo 3 semanas. Quando suas plantas estiverem prontas, você terá conseguido um clone pronto para ser cultivado no meio de sua escolha, seja ao ar livre ou indoor.

Guia de Composição Química 

Tenha em mente que existem diferentes tipos de meios, os minerais e quantidades podem variar conforme o tipo adotado. Esse guia foi escrito usando o meio Murashige-Skoog como exemplo, então certifique-se de ler e descobrir quais ingredientes e quantidades são preferidas no meio que você usa.

Estes são os nutrientes essenciais que suas plantas de cannabis precisam em altas quantidades e são indispensáveis na cultura de tecidos, sem eles, suas plantas não conseguirão produzir matéria verde.

Esses são os nutrientes essenciais de que suas plantas de cannabis precisam em menores quantidades, mas também são fundamentais na cultura de tecidos. Sem eles, suas plantas não crescerão corretamente e apresentarão sintomas de deficiência.

Essas vitaminas são essenciais para auxiliar no metabolismo das plantas, especialmente na cultura de tecidos, por isso garanta que está fornecendo essas vitaminas nas quantidades certas.

6. Conclusão

A cultura de tecidos em cannabis pode parecer difícil, mas é relativamente simples; você só precisa garantir as melhores condições e tomar todos os cuidados para garantir a maior taxa de sobrevivência possível. Sabemos que essa técnica é relativamente nova e pode ser bastante cara, então nem todos os cultivadores terão acesso ao equipamento necessário, mas se você trabalha ou criou seu próprio laboratório em casa, por favor, compartilhe seu conhecimento com outros cultivadores, deixe seu comentário logo abaixo!

Referências externas

1. Plant Tissue Cultures. - Kärkönen, Anna & Santanen, Arja & Iwamoto, Kuninori & Fukuda, Hiroo. (2020). 
2. Nanotechnology and Plant Tissue Culture. - Tariq, Amina & Ilyas, Saiqa & Naz, Shagufta. (2020). 
3. Plant Tissue Culture Media, Recent Advances in Plant in vitro Culture. - Annarita Leva and Laura M. R. Rinaldi (2012).